Informace o projektu
Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
- Kód projektu
- GA203/06/0047
- Období řešení
- 1/2006 - 12/2008
- Investor / Programový rámec / typ projektu
-
Grantová agentura ČR
- Standardní projekty
- Fakulta / Pracoviště MU
-
Přírodovědecká fakulta
- prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.
- doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.
- Mgr. Andrea Klimíčková
- Mgr. Jiří Konečný, Ph.D.
- doc. RNDr. Josef Tomandl, Ph.D.
- Klíčová slova
- kapilární elektroforéza, xenobiotika, metabolismus
Cílem tohoto projektu je zdokonalit a rozšířit aplikační množnosti kapilární elektroforézy, speciálně její modifikace metody EMMA (Electrophoretically Mediated MicroAnalysis) pro stanovení aktivity a studium membránově vázaných enzymů. Konkrétně bude studie zaměřena na skupinu důležitých detoxikačních enzymů – cytochromy P450, které se v organismu podílí mimo jiné na metabolismu léčiv, jejich detoxikaci, případně aktivaci. Hlavní pozornost bude zaměřena na možnost kombinace metody EMMA s technikou částečného plnění kapiláry, při které je část kapiláry naplněna pufrem optimálním pro příslušnou enzymovou reakci, zatímco zbytek kapiláry základním elektrolytem optimálním pro separaci substrátů a především produktů příslušné enzymové reakce. Tím by měla být odstraněna hlavní limitace metody EMMA, kterou je právě potřeba stejného pufru – základního elektrolytu jak pro enzymovou reakci, tak pro vlastní separaci. Uvedená metoda bude využita pro stanovení aktivity a studium různých izoenzymů cytochromů P450 a to za použití různých módů kapilární elektroforézy – kapilární elektroforézy ve volné kapiláře, micelární elektrokinetické kapilární chromatografie, případně chirální kapilární elektroforézy. Bude přitom použita klasická UV-VIS detekce s diodovým polem, pro identifikaci analytů bude testována MS v off-line uspořádání. Jako zdroj cytochromů P450 bude využita mikrosomální frakce, v případě dostupnosti rekombinantní formy cytochromů P450. Jako substráty bude testována celá řada důležitých farmakologických substancí. Hlavní výhodou této metody je malá spotřeba chemikálií, což je důležité především v případě enzymových preparátů, substrátů, případně inhibitorů. Automatizace všech kroků vlastního stanovení navíc eliminuje možné experimentální chyby.
Publikace
Počet publikací: 36
2007
-
Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography as a Tool for Cytochrome P450 2C9 Activity Study
HPLC 2007. Abstract Book., rok: 2007
-
Microsomes & Microreaction in CE (invited lecture)
Rok: 2007, druh: Další prezentace na konferencích
-
Review: Application of capillary electrophoresis in drug metabolism studies
Current Analytical Chemistry, rok: 2007, ročník: 3, vydání: 3
-
Study of recombinant cytochrome P450 2C9 activity with diclofenac by micellar electrokinetic capillary chromatography
Electrophoresis, rok: 2007, ročník: 28, vydání: 8
-
Study of substrate inhibition by electrophoretically mediated microanalysis in partially filled capillary.
Journal of Chromatography A, rok: 2007, ročník: 1150, vydání: 1-2
2006
-
Determination of enzymatic activity by capillary electrophoresis (review).
Journal of Chromatography B, rok: 2006, ročník: 841, vydání: 1-2
-
Determination of midazolam and its metabolites in rat plasma and perfuse medium by HPLC
CD of the abstracts of the 29th international symposium on capillary chromatography, rok: 2006
-
Determination of nifedipine as a probe substrate of cytochrome P450 3A1/2 activity in rats
Proceedings from XX. Biochemický zjazd, rok: 2006
-
ELECTROPHORETICALLY MEDIATED MICROANALYSIS AS A TOOL FOR KINETIC STUDIES OF ENZYMES
XX. Biochemický zjazd, rok: 2006
-
Electrophoretically mediated microanalysis as a tool for the enzyme study
CD of the abstracts of the 29th international symposium on capillary chromatography, rok: 2006